类风湿因子检测
类风湿因子（rheumatoid factor，RF）是类风湿关节炎（rheumatic arthritis ，RA）等疾病患者血清中出现的一种自身抗体。RF与变性IgG的Fc片段结合，形成免疫复合物沉积于关节腔，激活补体，造成免疫病理损伤。
原理
在微孔板上包被纯化的兔IgG，加入经稀释的待测血清后，若血清中存在RF，就与兔IgG形成复合物，该复合物和辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM抗体结合，洗涤后加入邻苯二胺显色，终止反应后测定各反应孔A492值，由标准曲线可查出与标本的吸光度值对应的血清IgM型RF浓度。
材料
抗原：兔IgG
微孔板
封口膜
包被缓冲液：碳酸盐缓冲液（50nmol/L，PH9.6）
包被液：兔IgG溶于包被缓冲液中，使终浓度为100mg/L
洗涤液/稀释液：含0.05%Tween20的磷酸缓冲液（PBST）
封闭液：含10%牛血清白蛋白（100g/L）的碳酸盐缓冲液
酶标二抗：辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgM
底物：邻苯二胺（OPD）
终止液：2mol/L H2SO4
预处理待测血清：待测血清置56℃水浴箱孵育30min灭活补体
水浴箱
酶标仪
操作步骤
1、微孔板的测试孔中加入50μl包被液，对照孔中仅加入50μl包被缓冲液，封口膜封板，37℃过夜。
2、PBST洗涤至少3次，每次3min，最后一次洗完后要倒置拍干孔中残留洗涤液。
3、每孔加入50μl封闭液，37℃孵育1h。
4、同步骤2洗涤。
5、灭活的血清先1:10稀释，再连续1:4稀释5次，使血清稀释度从1:10至1:10 240。
6、每孔加入各稀释度血清50μl，4℃孵育3h。
7、同步骤2洗涤。
8、每孔加入50μl 1:1000稀释的酶标二抗，4℃孵育2h。
9、同步骤2洗涤。
10、配制底物液：20mg OPD溶于20ml pH5.0的柠檬酸缓冲液中，再加入8μl30%浓度的H2O2，混匀。
11、每孔加入50μl底物液，37℃避光孵育30min。
12、每孔加入50μl终止液，用酶标仪测定A492值。
结果分析
每反应板同时用参考血清按上法做标准曲线。
由各标本的A值可从标准曲线上查出所对应的血清RF浓度。
注意事项
1、兔IgG作为抗原和人IgG Fc段作为抗原在检测中无明显差异。
2、加入终止液后应轻拍微孔板以保证混合均匀。
3、每次实验需做阳性和阴性对照。