【江莱生物-老牌Elisa试剂盒厂家】

【江莱生物-老牌Elisa试剂盒厂家】 2014-09-11 13:44:35

原理

Elisa试剂盒是将完成一个项目所需要的各种试剂、材料组合在一起,方便实验人员使用的一种工具。由于分子生物学实验中用到的试剂种类繁多,配置要求较高,但用量较少,因此通过试剂盒,可以减轻实验人员的工作量,而且保证实验结果的稳定。

目前用于质粒抽提的Elisa试剂盒很多,绝大部分Elisa试剂盒均在碱裂解法的基础上,利用硅胶柱吸附质粒DNA,去除杂质,之后用洗脱缓冲液将吸附的质粒DNA洗脱下来。此法所得的质粒DNA绝大部分为超螺旋DNA,纯度较高;同时,此法不需要使用酚、氯仿等有机溶剂,操作更为简便。

实验试剂

1、LB液体培养基:10g细菌培养用胰蛋白胨(tryptone),5g细菌培养用酵母抽提物(yeast extract),10gNaCl,溶于800ml水中,加热溶解后,用10mol/L NaOH调节pH值至7.0,121℃高压灭菌20min,备用。

2、50mg/ml氨苄青霉素溶液:1g氨苄青霉素溶于200ml水中,用0.22μm滤膜过滤除菌,分装至小管中,-20℃贮存。

3、质粒小量抽提Elisa试剂盒

4、无水乙醇

5、琼脂糖凝胶电泳相关试剂

实验步骤

1、将RNase A溶液全部加入溶液I中,均匀混合后4℃保存。

2、在Wash Solution中加入4倍体积的无水乙醇。

3、从平板培养基上挑选单菌落接种至5ml含有50μg/ml氨苄青霉素的液体LB培养基中,37℃过夜培养,取1.5ml的过夜培养菌液,12000r/min离心2min,弃上清液。

4、用250μL Solution I(含RNase A),充分悬浮细菌沉淀,静置2min。

5、加入250μL Solution II,轻轻地上下翻转五六次,至溶液呈澄清透明状。

6、加入350μL Solution III,温和混匀,静置5min后,12000r/min离心10min。

7、将Elisa试剂盒中的EZ-10 Column置于Colleetion Tube上,将6的上清液转移至EZ-10 Column中,8000r/min离心2min,弃去滤液。

8、在EZ-10 Column中加入500μL Wash Solution,10000r/min离心1min。

9、重复步骤8.

10、弃去滤液,10000r/min再离心2min,以充分去除Wash Solution。

11、将EZ-10 Column转移到1个新的1.5mL离心管中,在EZ-10 Column中加入50μL Elution Buffer,静置5min,10000r/min离心2min,离心管中所得即为质粒DNA。

12、取5μL样品进行琼脂糖凝胶电泳检测。

注意事项

1、严格按照Elisa试剂盒说明书上的操作步骤进行,不可随意更改相关溶液体积及或离心时间、速度等。

2、在将溶液加入EZ-10 Column中时,枪头不要触碰硅胶膜。



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